1．無(wú)菌環(huán)境
無(wú)毒和無(wú)菌是體外培養細胞的首要條件。細胞在活體內，解毒系統和免疫系統可抵抗微生物或其他有害物質(zhì)的入侵，但細胞在體外培養的過(guò)程中，缺乏機體免疫系統的保護而喪失對微生物的防御能力和對有害物質(zhì)的解毒能力。為保證細胞能在體外環(huán)境中生長(cháng)繁殖，必須要確保無(wú)菌工作區域、良好的個(gè)人衛生、無(wú)菌試劑和培養基以及無(wú)菌操作。
常見(jiàn)的微生物污染有支原體、細菌、真菌。支原體無(wú)致死毒性，可與細胞長(cháng)期共存，對細胞有潛在影響，但體積小，不易鑒別，可借助于地衣紅或Hoechst33342染色來(lái)進(jìn)行檢測。細菌增殖快，在短時(shí)間內即可大量擴增，并產(chǎn)生毒素殺死細胞。真菌的種類(lèi)繁多，肉眼可見(jiàn)，漂浮于培養液面上，可呈絲狀、管狀或樹(shù)枝狀等。
2.合適的溫度
一般哺乳類(lèi)與禽類(lèi)細胞在體外培養的適宜溫度是37～38℃，不適宜的環(huán)境溫度會(huì )影響細胞的生長(cháng)。細胞對低溫的耐受能力要強于對高溫的耐受能力，在低溫下，細胞的代謝活力及核分裂能力降低。若溫度不低于0℃，雖然細胞代謝受到影響，但無(wú)損傷作用；25～35℃時(shí)，細胞以緩慢的速度生長(cháng)；但若被置于40℃數小時(shí)，則不僅不利于細胞生存、生長(cháng)，甚至可導致其死亡。
3．氣體環(huán)境與pH
細胞的體外培養需要理想的氣體環(huán)境，氧氣、二氧化碳是細胞生存的必要條件。氧氣參與細胞的三羧酸循環(huán)，為細胞生存、代謝與合成提供能量；二氧化碳既是細胞的代謝產(chǎn)物，是細胞生長(cháng)的必需成分，又與維持培養液的pH有關(guān)。大多數細胞適宜的pH范圍往往是7.2～7.4。在開(kāi)放式培養中，以5%的二氧化碳氣體比例為宜。
4.適宜的滲透壓
高滲溶液或低滲溶液會(huì )引起細胞發(fā)生褶皺、腫脹、破裂。因此，滲透壓是體外培養細胞的重要條件之一。多數體外培養的細胞對滲透壓都有一定的耐受能力，實(shí)際應用中，260～320mmol/L的滲透壓可適用于大多數細胞。
恒遠生物致力于建設種類(lèi)qi全的細胞與微生物標準制品資源庫，為大學(xué)、科研機構及生物醫藥研發(fā)企業(yè)提供高質(zhì)量、可回溯、品控可靠的生物制品。主要包括原代細胞及通用細胞株、細胞培養周邊試劑、微生物標準品等產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)、生產(chǎn)、儲存和銷(xiāo)售。歡迎咨詢(xún)！
點(diǎn)擊交流