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原代與傳代培養之前的區別

  • 發(fā)布日期:2014-10-09      瀏覽次數:5690
    • 原代培養:即*次培養,是指將培養物放置在體外生長(cháng)環(huán)境中持續培養,中途不分割培養物的培養過(guò)程。有幾方面含義: 
           培養物一經(jīng)接種到培養器皿(瓶)中就不在分割,任其生長(cháng)繁殖; 
           原代培養中的“代”并非細胞的“代”數,因為培養過(guò)程中細胞經(jīng)多次分裂已經(jīng)產(chǎn)生多代子細胞; 
           原代培養過(guò)程中不分割培養物不等于不更換培養液,也不等于不更換培養器皿。 
      正常 細胞培養 的世代數有限,只有癌細胞和發(fā)生轉化的細胞才能無(wú)限生長(cháng)下去。所謂轉化即是指正常細胞在某種因子的作用下發(fā)生突變而具有癌性的細胞。目前世界上許多實(shí)驗室所廣泛傳用的HeLa細胞系就是1951年從一位名叫Henrietta Lacks的婦女身上取下的宮頸癌 細胞培養 而成。此細胞系一直延用至今。 
      原代培養的細胞一般傳至10代左右就不易傳下去了,細胞的生長(cháng)就會(huì )出現停滯,大部分細胞衰老死亡。但是有極少數的細胞能夠度過(guò)“危機”而繼續傳下去,這些存活的細胞一般能夠傳到40~50代,這種傳代細胞叫做細胞株。細胞株的遺傳物質(zhì)沒(méi)有發(fā)生改變,在培養過(guò)程中其特征始終保持。當細胞株傳至50代以后又會(huì )出現“危機”,不能再傳下去。但是有部分細胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變,并且帶有癌變的特點(diǎn),有可能在培養條件下無(wú)限制地傳代下去,這種傳代細胞稱(chēng)為細胞系。 
      原代培養是建立各種細胞系(株)必經(jīng)的階段,其是否成功與組織污染與否、供體年齡、培養技術(shù)和方法、適宜培養基的選擇等多種因素有關(guān)。由于原代培養的細胞轉化性極小,對病毒敏感性好,因此適應制備疫苗等生物制品;但也存在有潛在外源因子、不能事先檢查標本、且受供體年齡健康狀況的影響而導致批間差異大等缺陷。目前常用的原代 細胞培養 有雞胚成纖維細胞及豬腎、猴腎、地鼠腎等原代細胞。 
      原代培養的基本過(guò)程包括取材、培養材料的制備、接種、加培養液、置培養條件下培養等步驟,在所有的操作過(guò)程中,都必須保持培養物及生長(cháng)環(huán)境的無(wú)菌。 
      多數情況下,分散的細胞若屬于貼壁依賴(lài)型細胞,就能黏附、鋪展于培養器皿和載體表面生長(cháng)而形成細胞單層,這種培養方式稱(chēng)為單層 細胞培養 (monolayer culture),又叫貼壁培養(adherent culture)。少數情況下,培養的細胞沒(méi)有貼壁依賴(lài)性,可通過(guò)專(zhuān)門(mén)設備使細胞始終處于懸狀態(tài)而在體外生長(cháng),這種形式稱(chēng)為懸浮培養(suspension culture)。如何讓接種的細胞盡快貼壁,是決定培養成功的關(guān)鍵步驟: 
             取決于適當的生長(cháng)基質(zhì)表面; 
             可降低接種后培養液對細胞的浮力,如先少補加少量培養液,待細胞貼壁后再補足營(yíng)養液繼續培養; 
             注意適當的細胞接種密度,一般105個(gè)/ml左右。 
      傳代培養:當原代培養成功以后,隨著(zhù)培養時(shí)間的延長(cháng)和細胞不斷分裂,一則細胞之間相互接觸而發(fā)生接觸性抑制,生長(cháng)速度減慢甚至停止;另一方面也會(huì )因營(yíng)養物不足和代謝物積累而不利于生長(cháng)或發(fā)生中毒。此時(shí)就需要將培養物分割成小的部分,重新接種到另外的培養器皿(瓶)內,再進(jìn)行培養。這個(gè)過(guò)程就稱(chēng)為傳代(passage)或者再培養(subculture)。對單層培養而言,80%匯合或剛匯合的細胞是較理想的傳代階段。 
      體外培養技術(shù)中所謂的傳“代”概念并不等于細胞生物學(xué)中“親代細胞”與“子代細胞”中“代”的概念。傳代培養的實(shí)質(zhì)就是分割后再一次培養,可以相對地衡量培養物的培養年齡