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大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

  • 發(fā)布日期:2011-12-31      瀏覽次數:1881
    • 大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
      本試劑盒僅供研究使用。
      檢測范圍:                                                                                                                    96T
      10U/L -320 U/L 
      使用目的:
      本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶
      (NAG)含量。
      實(shí)驗原理
      本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)水
      平。用純化的大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)抗體包被微孔板,制成固相抗體,
      往包被單抗的微孔中依次加入 NAG,再與 HRP 標記的 NAG 抗體結合,形成抗體-抗原-酶
      標抗體復合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色,
      并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 NAG 呈正相關(guān)。用酶標儀在
      450nm 波長(cháng)下測定吸光度(OD 值),通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品中大鼠 N-乙酰-β-D-氨基葡萄
      糖苷酶(NAG)濃度。  
      試劑盒組成  
      1  30倍濃縮洗滌液  20ml×1瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
      2  酶標試劑  6ml×1瓶  8  標準品(640 U/L)  0.5ml×1 瓶
      3  酶標包被板  12 孔×8條  9  標準品稀釋液  1.5ml×1 瓶
      4  樣品稀釋液  6ml×1瓶  10  說(shuō)明書(shū)  1 份
      5  顯色劑A 液  6ml×1瓶  11  封板膜  2 張    
      6  顯色劑B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個(gè)
      標本要求  
      1.標本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻進(jìn)行,提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能
      馬上進(jìn)行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
      2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
      操作步驟
      1.  標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?,用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
      釋。
      320U/L  5 號標準品  150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液
      160 U/L  4 號標準品  150µl的5 號標準品加入150µl標準品稀釋液
      80 U/L  3 號標準品  150µl的4 號標準品加入150µl標準品稀釋液
      40 U/L  2 號標準品  150µl的3 號標準品加入150µl標準品稀釋液
      20 U/L  1 號標準品  150µl的2 號標準品加入150µl標準品稀釋液
       
       2.  加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同) 、標準孔、
      待測樣品孔。 在酶標包被板上標準品準確加樣50µl, 待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,
      然后再加待測樣品10µl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡
      量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
      3.  溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。      
      4.  配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
      5.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
      重復 5次,拍干。
      6.  加酶:每孔加入酶標試劑50µl,空白孔除外。  
      7.  溫育:操作同3。
      8.  洗滌:操作同5。
      9.  顯色:每孔先加入顯色劑A50µl,再加入顯色劑B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
      15 分鐘.
      10.  終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時(shí)藍色立轉黃色) 。
      11.  測定:以空白空調零,450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度(OD 值) 。 測定應在加終止
      液后 15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。
      大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)試劑盒注意事項
      1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開(kāi)封后如未
      用完,板條應裝入密封袋中保存。
      2.濃洗滌液可能會(huì )有結晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結果。
      3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時(shí)間
      控制在5 分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
      4. 請每次測定的同時(shí)做標準曲線(xiàn),做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD 值
      大于標準品孔*孔的OD 值) ,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計
      算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5) 。
      5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
      6.底物請避光保存。
      7.嚴格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
      8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
      9.本試劑不同批號組分不得混用。
      10.  如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準。
      保存條件及有效期
      1.試劑盒保存: ;2-8℃。
      2.有效期:6個(gè)月
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