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ELISA“花板”原因總結

  • 發(fā)布日期:2020-12-16      瀏覽次數:1463
    •     所謂“花板”,就是空白、陰陽(yáng)性對照及室內質(zhì)控孔結果正常,而標本孔的OD值卻偏高。“花板”現象的出現,往往會(huì )給實(shí)驗者判讀結果帶來(lái)麻煩。

          為了避免“花板”問(wèn)題的出現,降低檢測的假陽(yáng)性率,獲得更理想的實(shí)驗結果,在檢測過(guò)程中應采取下列措施:

          1.在選擇ELISA試劑時(shí),應選擇靈敏度高、特異性好、穩定性好、批間差小、操作方便、省時(shí)的試劑。

          2.在所有標本進(jìn)行檢測的過(guò)程中,所用的儀器及加樣過(guò)程都處于正常狀態(tài)的情況下,步驟均按照各種試劑說(shuō)明書(shū)的要求去做,排除實(shí)驗所用儀器和操作步驟對實(shí)驗結果的影響。

          3.血液標本應置于室溫下1-2h,使血液凝固收縮,然后離心檢測或讓血液過(guò)夜后再檢測。這樣才能使得血液充分收縮,讓標本中的非特異性物質(zhì)所致的假陽(yáng)性率降至lowest。

          4.檢測之前,加大離心轉速,盡量延長(cháng)時(shí)間,使血細胞和纖維蛋白充分沉淀,讓血細胞與血清*分離。

          5.加樣時(shí)不能加入紅細胞或纖維蛋白,要按照操作說(shuō)明書(shū)去做,否則會(huì )影響實(shí)驗結果。

          6.對于血清中存在的紅細胞或纖維蛋白原,可以在加樣前離心時(shí)得到控制,同樣也可以通過(guò)適當增加洗滌次數和浸泡時(shí)間來(lái)進(jìn)一步減輕或避免對實(shí)驗結果的影響。同樣,對于血液存在的非特異性的IgG,增加洗滌次數和延長(cháng)浸泡時(shí)間也同樣有效。

          7.封板溫育時(shí),各孔一定要封嚴,防止陽(yáng)性標本的液體蒸發(fā),產(chǎn)生周邊現象從而導致“花板”的出現。

          8.孵育時(shí)間過(guò)長(cháng),增加了固相載體吸附非特異性蛋白的可能性,也會(huì )造成“花板”。因此,除把握孵育時(shí)間外,在加樣過(guò)程中也應嚴格控制時(shí)間,標本較多時(shí)可分批操作。

          9.手工洗板時(shí)應注意液體被濺出或孔與孔之間的液體溢出,連成整體液面后產(chǎn)生“花板”。

          10.用洗板機洗板時(shí)應防止針口有纖維蛋白或異物,這些異物在洗板的過(guò)程中易產(chǎn)生拖帶現象而導致“花板”的出現。

          11.洗液的溫度也會(huì )影響洗板的干凈程度,尤其是冬天溫度過(guò)低時(shí)容易出現“花板”問(wèn)題。

          12.洗液要注滿(mǎn)孔,孔壁洗滌不干凈也易造成“花板”現象。

          13.洗液要盡量新鮮配制,放置時(shí)間過(guò)長(cháng)易產(chǎn)生絮狀物或渾濁,造成堵孔或花板。

          14.有些廠(chǎng)家的試劑顯色液不穩定,使用前容易變藍,如在實(shí)驗前不仔細檢查,很容易導致“花板”現象的發(fā)生,這也提醒實(shí)驗者應使用新鮮的顯色液,保證實(shí)驗的準確性。

          上海恒遠擁有嚴格的研發(fā)和驗證體系,充分保障了產(chǎn)品的良好性能。通過(guò)嚴格的篩選,捕獲抗體和檢測抗體,再進(jìn)行科學(xué)的濃度調配,形成雙抗體夾心法。通過(guò)精心選擇抗體對、優(yōu)化緩沖液,來(lái)保證消除基質(zhì)效應,只識別目標分析物,特異性可靠。試劑盒可以檢測血清、血漿、培養上清、組織等多種樣本。