邊緣效應的定義是酶標板孔內中心部分與酶標板孔內遠離中心部分之間相比存在明顯的信號差異,一般歸因于兩個(gè)主要因素。
孵育環(huán)境確實(shí)對實(shí)驗有影響嗎?
是的。孵育時(shí)溫度不均會(huì )引起邊緣效應。請嚴格按照推薦的溫度進(jìn)行孵育。如果條件允許,可以在能夠控溫的孵育器中進(jìn)行孵育。
在使用之前將所有試劑平衡至室溫。(除非特別說(shuō)明)
在實(shí)驗開(kāi)始之前檢查工作的環(huán)境溫度。如果曲線(xiàn)很平直,可能是由于工作環(huán)境溫度低于氣溫所致。
在孵育末期我注意到蓋板一側突起來(lái)了,這是否會(huì )影響我的實(shí)驗結果?
蓋板如果使用不恰當會(huì )導致邊緣效應。
使用96孔板的ELISA測定中,常發(fā)現有“邊緣效應”,即外周孔顯色較中心孔深。經(jīng)研究證實(shí)在溫育中的熱力學(xué)梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身為不良熱導體,在實(shí)驗室的常規ELISA測定中,將板從室溫(通常在25℃左右)置于37℃溫箱,板也升溫時(shí),在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學(xué)梯度。因此使用水浴或在將反應溶液加入至板孔中時(shí),將板和溶液均加熱至溫育溫度(如37℃),就可以很容易地排除“邊緣效應”,并且可提高測定的重復性。
Elisa試劑盒還有就是在試驗中,必定有運用微量加樣器參加樣本的步驟。提示留意:加樣不行太快,要防止加在孔壁上部,不行濺出和發(fā)生氣泡。ELISA試劑盒太快的話(huà)無(wú)法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區,易致使非特異吸附。濺出會(huì )對附近孔發(fā)生污染。出現氣泡則反響液界面有區別。所以,有時(shí)分一份標本用一樣的試劑盒這次測定為陽(yáng)性,下次測定為陰性,通常就是上述加樣及試劑的過(guò)錯所造成的。
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